Fluo-3, AM
貨號(hào)：S21010
保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
產(chǎn)品說(shuō)明：
CAS ：121714-22-5
中文名：鈣熒光探針 Fluo-3, AM
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthe nyl)phenoxy]-2-(2-
amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tet raacetic acid, pentaac etoxymethyl ester
結(jié)構(gòu)式：
分子式：C 51 H 50 C l2 N 2 O 23
分子量：1129.85
性質(zhì)：
1. 外觀(guān)：紅色粉末
2. 純度：≥90% （HPLC）
3. 產(chǎn)品描述：
Fluo-3, AM 是常用的檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切
形成 Fluo-3 ，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-3 若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)
鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，大激發(fā)波長(zhǎng)為 506nm ，大發(fā)射波長(zhǎng)為 526nm 。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用
的激發(fā)波長(zhǎng)為 488nm 左右，發(fā)射波長(zhǎng)為 525～530nm 。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)
鈣離子濃度的變化。
： 操作說(shuō)明： （for Human T cells）
1 ，試劑
2 mM 的 Fluo-3, AM/DMSO （將 1mg Fluo-3, AM 溶于 442µL DMSO ）
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na 2 HPO 4 ，137mM NaCl，5mM KCl， 1mM CaCl 2 ， 0.5mM
MgCl 2 ，5mM Glucose，0.1% BSA，pH 7.4 ）
2 ，操作
（1） 向 Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入 16.5mg Pluronic F127， Pluronic F127 可以防止 Fluo-3, AM 在 HBSS 中
聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
（2） 用 HBSS 稀釋 Fluo-3, AM 溶液，制備 4µM 的 Fluo-3, AM 工作液。
（3） 將 Fluo-3, AM 工作液加入細(xì)胞，在 37℃培養(yǎng) 20 分鐘。
（4） 加入 5 倍體積的含有 1%胎牛血清的 HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng) 40 分鐘。
（5） 用HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞 3 次，然后用HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制成 1×10 5  cells/mL 的
溶液。
（6） 37 ℃下培養(yǎng) 10 分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng) 506nm，發(fā)射波長(zhǎng) 526nm 。
注意：標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類(lèi)而異，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定適宜條件。以上方法僅供參考。