Western blotting（小鼠/兔IgG） DAB法顯色試劑盒
 

貨號(hào)：
SW1010 Western blotting (小鼠 IgG)DAB 顯色試劑盒
SW1020 Western blotting (兔 IgG)DAB 顯色試劑盒
SW1030 Western blotting (山羊 IgG)DAB 顯色試劑盒
SW1040 Western blotting(小鼠/兔 IgG)DAB 顯色試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容：
    1. 封閉試劑 30g。
    2. 10 倍濃縮抗體稀釋液  50ml。
    3. HRP 標(biāo)記二抗，  0.5ml，效價(jià) 1：500-3000。
    4. 20 倍 DAB 濃縮顯色液，5mlA+5mlB。
 

保存：
    -20℃避光密閉保存，一年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和 20 倍 DAB 顯色液 B 存放于2-8℃以方便使用。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
    SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色以檢測(cè)電泳分離的特異性的蛋白。

    經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。Western blotting 檢測(cè)系統(tǒng)除需要過(guò)氧化物酶標(biāo)記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學(xué)發(fā)光兩種試劑及相應(yīng)試劑盒。

操作步驟：(僅供參考)
常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:
     1) 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后，作好標(biāo)記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。
     2) 按 5g 封閉試劑加 100ml 雙蒸水計(jì)，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過(guò)的轉(zhuǎn)印膜，封閉液內(nèi)，搖床震動(dòng)，室溫封閉 30min。用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。
     3) 將 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1× （10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水， 混勻， 可 4℃保存三個(gè)月） 。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。
     4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來(lái)稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育或 37℃搖動(dòng)孵育 2h。此用過(guò)的抗體一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標(biāo)記，分開(kāi)孵育。
     5) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。
     6) 用稀釋好的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量，按 10ml 抗體稀釋液加入 10ul HRP 標(biāo)記二抗的比例，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃搖動(dòng)孵育 1h。此用過(guò)的抗體一般可回收第二天再使用一次。
    7) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 10min。
    8) 配制 DAB 顯色：根據(jù)用量，取 TBS-T 4ml，加入 DAB 顯色液 A、DAB 顯色液 B 各 200ul，混勻，加在膜正面，室溫下顯色。在目標(biāo)條帶顯出后，而且背景未出時(shí)，放入水中終止顯色。

注意事項(xiàng)：
    1. 請(qǐng)根據(jù)一抗來(lái)源選擇試劑盒。
    2. western blotting DAB 顯色法操作簡(jiǎn)單， 但其敏感性與 ECL 發(fā)光發(fā)有一定的差距， 一般只適用于豐度較高的蛋白。
    3. 可以根據(jù)顯色結(jié)果來(lái)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間。如背景過(guò)深，可延長(zhǎng)膜封閉時(shí)間，加長(zhǎng)終漂洗次數(shù)與時(shí)間。如果條帶過(guò)弱，可延長(zhǎng)抗體孵育時(shí)間。
    4. 如果*沒(méi)有條帶，請(qǐng)檢查前期蛋白處理及實(shí)驗(yàn)過(guò)程， 如果確認(rèn)無(wú)誤，反復(fù)兩次依舊無(wú)結(jié)果，請(qǐng)換用 ECL發(fā)光法顯色。
    5. TBS-T（0.01M）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào) PH 到 7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加 1000ml，混勻即可。 （也可按照自己的配制習(xí)慣來(lái)配制）
 

相關(guān)產(chǎn)品：

D1060  10× 電泳轉(zhuǎn)移緩沖液
A1800  抗體稀釋液（普通型）
T1081-500 10*TBST
SW3010 膜封閉液
SW3020 膜再生液
PE0010 ECL Plus 熒光檢測(cè)試劑 (ECL 超敏發(fā)光液 )
SW2010 Western blottingECL 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒

Western blotting（小鼠/兔IgG） DAB法顯色試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說(shuō)明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。