輔酶ⅡNADP(H)含量檢測(cè)試劑盒
有效期
6個(gè)月
儲(chǔ)存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱(chēng)
CoenzymeⅡ NADP(H) Content Assay Kit
檢測(cè)方法
可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產(chǎn)品型號(hào)：BC1100

更新時(shí)間：2025-08-25

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪(fǎng) 問(wèn) 量：1864

服務(wù)熱線(xiàn)

010-50973130

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產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測(cè)試劑盒-常量法

谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4（GPX4）活性檢測(cè) 總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測(cè) α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測(cè) 硫代葡萄糖苷含量檢測(cè) 生物堿含量檢測(cè) 總氧化狀態(tài)（TOS）檢測(cè) α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測(cè) 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測(cè) 水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測(cè) 植物銨態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測(cè)試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測(cè)定系列其它系列信號(hào)系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線(xiàn)粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

輔酶II NADP(H)含量檢測(cè)試劑盒（MTT顯色法）說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：BC1100
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱(chēng)	規(guī)格	保存條件
酸性提取液	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
堿性提取液	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1支	-20℃保存
試劑三	液體12mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四A	粉劑×1支	-20℃保存
試劑四B	液體5mL×1瓶	2-8℃保存
試劑五	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑六	液體70 mL×1瓶	2-8℃保存
NADP標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	-20℃保存
NADPH標(biāo)準(zhǔn)品	粉劑×1支	-20℃保存

溶液的配制：

試劑二：臨用前加入6mL蒸餾水充分混勻，溶解后2-8℃保存4周。
試劑四：臨用前將試劑四A溶解到試劑四B中，溶解后分裝保存，避免反復(fù)凍融，-20℃保存4周。
NADP標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入 1.27 mL 蒸餾水，即 5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。
NADPH標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入 1.2 mL 蒸餾水，即 5 µmol/mL，-20℃可以保存2周。

產(chǎn)品說(shuō)明：
輔酶Ⅱ NADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP⁺和 NADPH 含量測(cè)定可以計(jì)算 NADP（NADPH + NADP⁺)含量和 NADPH/NADP⁺比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP⁺比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP⁺和NADPH。NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定 NADPH 含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP⁺為NADPH，從而檢測(cè)NADP⁺含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：

如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三按比例配成混合液。
反應(yīng)過(guò)程中注意避光。
由于每一個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管，本試劑盒50管可以測(cè)定24個(gè)NADP⁺或NADPH。

如果測(cè)定吸光值超過(guò)線(xiàn)性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

NADP⁺的測(cè)定：稱(chēng)取 0.1g 綠蘿葉片，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定= A₂- A₁=0.092-0.036=0.056，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y₁=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x₁=0.055，NADP⁺含量得：NADP⁺ (nmol/g 質(zhì)量）= x₁÷W=0.55 nmol/g 質(zhì)量。

NADPH的測(cè)定：稱(chēng)取 0.1g 綠蘿葉片，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照= A₂’- A₁’=0.046-0.012=0.034，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y₂=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x₂=0.061，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質(zhì)量）= x₂÷W=0.614 nmol/g 質(zhì)量。

NADP⁺的測(cè)定：稱(chēng)取 0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定= A₂- A₁=0.217-0.108=0.109，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y₁=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x₁=0.155，NADP⁺含量得：NADP⁺ (nmol/g 質(zhì)量）= x₁÷W=1.55 nmol/g 質(zhì)量。

NADPH的測(cè)定：稱(chēng)取0.1g 大兔肝臟，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照= A₂’- A₁’=0.085-0.008=0.077，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y₂=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x₂=0.191，NADPH含量得：NADPH (nmol/g 質(zhì)量）= x₂÷W=1.91 nmol/g 質(zhì)量。

NADP⁺的測(cè)定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定= A₂- A₁=0.055-0.026=0.029，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y₁=0.531x+0.0266，根據(jù)標(biāo)曲得出x₁=0.005，NADP⁺含量得：NADP⁺ （nmol/mL）= 11 x₁=0.050 nmol/mL。

NADPH的測(cè)定：取0.1mL馬血清，按提取步驟提取后按照測(cè)定步驟操作，玻璃比色皿測(cè)得吸光值后計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照= A₂’- A₁’=0.028-0.012=0.016，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y₂=0.332x+0.0136，根據(jù)標(biāo)曲得出x₂=0.007，NADPH含量得：NADPH（nmol/mL）=11 x₂=0.080 nmol/mL。
標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋表
NADP⁺標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表 NADPH 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

序號(hào)	稀釋前濃度（nmol/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（nmol/mL）	序號(hào)	稀釋前濃度（nmol/mL）	標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（nmol/mL）
1	5000	10	990	50	1	5000	10	990	50
2	50	100	900	5	2	50	100	900	5
3	5	200	600	1.25	3	5	200	200	2.5
4	1.25	200	200	0.625	4	2.5	200	200	1.25
5	0.625	200	200	0.3125	5	1.25	200	200	0.625
6	0.3125	200	200	0.15625	6	0.625	200	200	0.3125
7	0.15625	200	200	0.078	7	0.3125	200	200	0.15625
8	0.078	200	200	0.039	8	0.15625	200	200	0.078
9	0.039	200	200	0.0195	9	0	200	200	0
10	0.0195	200	200	0.01
11	0	0	200	0