白蛋白含量檢測(cè)試劑盒（溴甲酚紫顯色法）說明書

微量法

貨號(hào)：BC5825

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 顯色液：臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一：試劑二：試劑三=10μL: 3990μL :40μL（4040μL，20T）的比例配制顯色液，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg/mL白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前取50μL10mg/mL白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，加入150μL提取液，配制成2.5mg/mL白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說明：

白蛋白是人體血漿中最主要的蛋白質(zhì)，由肝臟合成，是人體內(nèi)一種重要的營養(yǎng)物質(zhì)，可以維持血漿滲透壓，并可與多種營養(yǎng)物質(zhì)、激素和藥物相結(jié)合。白蛋白含量可以反映機(jī)體營養(yǎng)狀態(tài)，也可排查影響肝臟代謝功能的疾病，如肝硬化、肝損傷、營養(yǎng)不良、惡性腫瘤等。

在酸性環(huán)境下，白蛋白分子帶正電荷，與帶負(fù)電荷的溴甲酚紫（Bromocresol Purple，BCP）結(jié)合生成綠色復(fù)合物，在603nm處有特定吸收峰，該復(fù)合物吸光值與白蛋白濃度成正比。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、分析天平、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織樣本：按質(zhì)量（g）: 提取液體積（mL）1 : 5~10比例加入提取液（建議稱取0.1g樣本，加入1.0mL提取液），冰浴勻漿后，于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10⁶）：提取液體積（mL）5~10: 1的比例加入提取液（建議5百萬細(xì)菌/細(xì)胞加入1.0mL提取液），冰浴超聲破碎細(xì)菌/細(xì)胞（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時(shí)間5min），然后于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測(cè)。

3. 液體樣本：直接測(cè)定。若液體有渾濁則離心取上清測(cè)定。

二、測(cè)定步驟

1．可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至603nm，可見分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2．操作表：（微量玻璃比色皿/96孔板中加入下列試劑）

三、白蛋白含量計(jì)算

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

白蛋白含量（mg/mg prot）= ΔA測(cè)定×（C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V樣÷（V樣×Cpr）=2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

白蛋白含量（mg/g 質(zhì)量）= ΔA測(cè)定×（C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V樣÷（W×V樣÷V樣總）=2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

3. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

白蛋白含量（mg/10⁴ cell）=ΔA測(cè)定×（C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V樣÷（V樣×N÷V樣總）=2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N

4. 按液體體積計(jì)算

白蛋白含量（mg/mL）= ΔA測(cè)定×（C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V樣÷V樣= 2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，2.5mg/mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；N：細(xì)菌/細(xì)胞總數(shù)，以10⁶計(jì)。

注意事項(xiàng)：

1、 如果?A測(cè)定小于0.005或測(cè)定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定；如果?A測(cè)定大于0.4，建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。

2、 如果樣本加入顯色劑后出現(xiàn)渾濁，建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取20μL人血清樣本，用提取液稀釋10倍，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算：ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.371-0.117=0.254，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.28-0.117=0.163，按液體體積計(jì)算得：

白蛋白含量（mg/mL）=2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×10 =38.957 mg/mL。

參考文獻(xiàn)：

[1] Tada S, Yasukawa K, Yatomi Y, et al. A simple colorimetric assay to determine the concentration and proportion of human mercaptalbumin[J]. Practical Laboratory Medicine, 2022, 31: e00281.

[2] Muramoto Y , Matsushita M , Irino T .Reduction of reaction differences between human mercaptalbumin and human nonmercaptalbumin measured by the bromcresol purple method[J].Clinica Chimica Acta, 1999, 289(1-2):69-78.

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