血清銅離子（Cu）含量檢測試劑盒說明書

微量法

貨號：BC5645

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：若有試劑析出，置于37℃水浴溶解即可。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mmol/L（即10000µmol/L）硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

銅是人體必需的微量元素之一，是許多酶的重要組成成分，它可以和蛋白質(zhì)結(jié)合形成銅蛋白，具有保護細(xì)胞的功能；血漿中的銅大部分與球蛋白結(jié)合形成銅藍蛋白，對紅細(xì)胞的生成具有重要作用。因此，測定血清銅可知體內(nèi)是否缺銅。

在酸性條件下，Cu²⁺從銅藍蛋白和清蛋白中解離出來，與絡(luò)合劑3,5-二溴-PAESA反應(yīng)，產(chǎn)生紫色絡(luò)合物，在580nm處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)吸光度與濃度成正比，從而計算出Cu²⁺濃度。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

血漿/血清：直接測定。若有渾濁請離心后取上清置于冰上待測。（注意：血漿樣本不能用EDTA作為抗凝劑，建議使用肝素作為抗凝劑）。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至580nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

2、 80µmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：取100µL 10mmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液加入400μL 蒸餾水混勻，即2000µmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品；再取40μL 2000µmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品和960μL 蒸餾水混合，即配成80µmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、 實驗前根據(jù)樣本量取部分試劑一37℃預(yù)熱10min。

4、 操作表：（在1.5mLEP管或96孔板中加入下列試劑）

三、血清銅離子（Cu）含量的計算

血清銅離子（Cu）含量（μmol/L）=ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）=80×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，80µmol/L。

注意事項：

1. 37℃孵育5min后請立即測定吸光度，若樣本數(shù)量過多，可分批次測定，盡量確保在20min內(nèi)完成測定。

2. 如果樣本測定吸光值大于0.5，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進行測定，注意同步修改計算公式。

3. 如果樣本測定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值，可適當(dāng)增大樣本量，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管也需要進行相應(yīng)調(diào)整。

實驗實例：

1. 取馬血清10μL，按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.129-0.089=0.040，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.283-0.089=0.194，計算含量得：

血清銅離子含量（μmol/L）=80×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=16.495μmol/L。

2. 取人血清10μL，按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.160-0.089=0.071，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.283-0.089=0.194，計算含量得：

血清銅離子含量（μmol/L）=80×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=29.278μmol/L。

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